Práctica No. 6

Universidad Nacional Autónoma de México

Escuela Nacional Preparatoria #7

Ezequiel A. Chávez

Temas Selectos de Biología 

Práctica no. 6

Tinción Gram y Simple.

Acosta Ramos Esteban

Aguilar Bautista Jesus A.

Avila Hernández Said Neftali

Ramírez Cruz Gabriela Lizeth

Hipotesis:

Se requierirán distintos componentes para saber que tipo de microorganismos observamos y habitan en distintos ambientes.

Objetivo:

Saber como se realizan las distintas tinsiones para la observación de diversos organismos.

Introducción:

 La tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares. La tinción puede ser uniforme o presentar algunos gránulos en su interior. Utiliza un solo colorante (violeta de genciana, azul demetileno, fuscina diluida).La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se vean las formas y lasestructuras celulares básicas. En las tinciones simples se usa un único reactivo, que preferentemente es de tipo básico y contiene un cromógeno (compuesto que da color al tinte) con carga positiva, ya que la pared celular de las bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan el cromógeno. Se utilizansolamente para incrementar el contraste; todas las células absorberán el colorante y quedarán teñidas delmismo color. Por tanto, la tinción simple mejora la observación de la célula completa. Se fija el espécimen, seañade el colorante y se deja el tiempo adecuado para que se absorba, se retira el exceso de colorante y la preparación ya está lista para ser observada. Si se utiliza un mordiente (sustancia química utilizada par intensificar la coloración), hay que añadirlo justo antes del colorante.

Materiales:

•      Aza de siembra.
• ·         Agua destilada.
• ·         Yakult.
• ·         Lámpara de alcohol.
• ·    Colorante cristal.
• Microscopio
• Porta y Cubre objetos.

Tinción de Gram

La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose bacterias gram positivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias gram negativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.

Un microorganismo gram positivo debe presentar una pared celular sana. El mismo microorganismo, si sufre daño de la pared por una u otra causa, se vuelve gram negativo. Esto indica la importancia de la pared para la retención o el escape del colorante. Una posible teoría del mecanismo de tinción es la siguiente:

El colorante básico entra al microorganismo, donde forma con el yodo una laca insoluble en agua. El alcohol o la acetona empleados para aclarar, deshidrata las paredes de los microorganismos gram positivos, tratados con mordiente, y forma una barrera que la laca no puede atravesar. En las células gram negativas, los lípidos de la pared (más abundantes que en las células gram positivas) se disuelven por este tratamiento, lo que permite el escape del complejo de cristal violeta con yodo. Algunos autores objetan esta teoría, pero es indudable la importancia general de la pared celular.

Metodología

• Recoger muestras.
• Hacer el extendido con un palillo de madera.
• Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.
• Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado tres veces aproximadamente).
• Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar un minuto.
• Enjuagar con agua.
• Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente.
• Enjuagar con agua.
• Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos según la concentración del reactivo (parte crítica de la coloración). (las gram - se decoloran, las gram + no)
• Enjuagar con agua.
• Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar un minuto. Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias gram negativas.

Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x

     

Tinción Simple

La tinción simple se basa en la afinidad del colorante por los componentes celulares. La tinción puede ser uniforme o presentar algunos gránulos en su interior. Utiliza un solo colorante (violeta de genciana, azul demetileno, fuscina diluida).La tinción simple se utiliza para destacar el microorganismo completo para que se vean las formas y lasestructuras celulares básicas. En las tinciones simples se usa un único reactivo, que preferentemente es de tipo básico y contiene un cromógeno (compuesto que da color al tinte) con carga positiva, ya que la pared celular de las bacterias posee componentes con carga negativa que atraen y enlazan el cromógeno. Se utilizansolamente para incrementar el contraste; todas las células absorberán el colorante y quedarán teñidas delmismo color. Por tanto, la tinción simple mejora la observación de la célula completa. Se fija el espécimen, seañade el colorante y se deja el tiempo adecuado para que se absorba, se retira el exceso de colorante y la preparación ya está lista para ser observada. Si se utiliza un mordiente (sustancia química utilizada par intensificar la coloración), hay que añadirlo justo antes del colorante.

Metodología

Las tinciones simples se realizan sobre preparaciones previamente secadas. Sobre un portaobjetos con unasuspensión de microorganismos previamente secada y fijada a la llama, se vierte una solución diluida de uncolorante y se mantiene durante uno o dos minutos; a continuación se lava varias veces con agua y se seca.Debido a que las células son muy pequeñas, este tipo de preparación suele observarse con aceite de inmersiónen la lente objetivo.

Conclusiones:

Nos dimos cuenta de que realmente hay que llevar diferentes proceso para la diferenciacion de los microorganismos, hay algunos que son más complejos ya que se necesitan más fijadores para que se puedan marcar más estos organismos, y siempre se verán en el microscopio a una intensidad de luz diversa para saber de que organismos hablamos.

Bibliografía

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm 

Introducción a la Microbiología Tortora.